作者:子非鱼(转载请注:解螺旋·医生科研助手)
最近Nature的一则新闻“中国科学家与假冒试剂的秘密战争”刷爆朋友圈,首次揭示中国存在一个利润丰厚的假冒生物试剂市场。其中,抗体就是造假的重灾区,其造假手段可谓是五花八门,比如直接造假(根本不知道瓶子里装的是什么)、用分子量接近的廉价抗体冒充昂贵的稀有抗体(很难检测出来)等,最常见的就是稀释抗体,把一份试剂稀释成5份,导致效价下降。
我们都知道,western blot、免疫组化、ELISA等常规实验技术个个都不离开抗体,可以说抗体的质量优劣关乎实验的成败,一旦抗体造假,那还怎么与科研愉快地玩耍?!抗体造假不仅浪费了一众科研者的宝贵时间、金钱及实验材料,甚至有可能让研究者误入歧途(得出一系列错误的实验结果或重复性差),而这无形中会损害他们所作出的努力以及学术声誉。
Nature这次抗体打假也只是揭露了冰山一角,却也暴露出了抗体产业中最汹涌的暗流:抗体质量稳定性和可靠性问题。早在08年,瑞士科研项目Human Protein Atlas(HPA)就曾对29家供应商的9000多种抗体(包括单抗和多抗)进行WB和IHC验证,来检测这些抗体是否有效。其结果竟令人大跌眼镜:49%的抗体完全不work,且仅有7%的抗体被认为是完全有效且拥有前后实验一致性。
而抗体之所以这么不稳定并难以产生有效性,究其原因,一方面是因为抗体市场庞杂带来了抗体质量的残次不齐,另一方面则是因为抗体本身就具有抗原交叉反应性(cross-reactivity)、多样性(variability)和实验差异性,进而也会影响抗体的特异性和亲和性。
现阶段我们身处于抗体乱象泥潭之中,如何获得一支真正有效的优质抗体,确实是所有研究者迫在眉睫的问题。可除了费时费力的进行反复多次的实验验证,就没有其他灵丹妙药帮我们淬炼识别真假抗体的火眼金睛么?难道在抗体市场鱼目混珠的今天,我们就只能束手无策吗?
NO!当然不会如此!既然质量是甄选优质抗体的首要标准,那么为了确保抗体的高质量,可选择一些可信赖的品牌。此外,还应注意抗体的供应商渠道是否正规,其供应链物流是否专业。在此,依据小编多年的抗体使用心得,给大家推荐一些可靠且口碑好的抗体公司。
优先推荐的是生产商且拥有国际品牌的中外合资跨国公司,主要优势有:1)国内订货到货周期短(国外公司一般3-4周,国内公司最多1周);2)售前售后服务方便到位(这一点非常重要,国外抗体咨询投诉周期一般都非常长,国内公司一般1周就可以解决,还可以免费索取一些抗体小样);3)性价比高,价格是国外的1/3左右,而且有小包装规格,近年来这些品牌也被国内外学术界认可,所以你懂的。
而国外抗体知名公司主要有两类:销售型公司和生产型公司,前者自己不生产产品或者只生产一小部份产品,大部份产品来自于其他公司,如Abcam、Sigma Aldrich、Thermo Fisher、ACRIS、Merck Millipore, Novus Biologicals 等,对于后者小编简单介绍以下几个公司:
其次,完善的验证数据及详细的信息标准可是优质抗体选择的必要条件,比如是否明确标注其可以用于WB、CHIP等实验、是否有足够的数据支持证明该抗体适用于某一组织或者样本、是否有明确的抗体建议稀释浓度、该抗体的识别位点是连续的氨基酸序列的一级结构还是非连续性氨基酸的三维结构位点……这些信息和数据的真实性及完整性是保证WB、CHIP等实验顺利进行的关键。
另外,有效的内参抗体是实验结果真实可靠的重要凭证,尤其在WB实验中,常会借助内参(细胞中恒定表达的蛋白)来校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差。值得注意的是,不同的内参抗体只适用于一定范围的样本和组织,我们需要查阅参考文献,并根据样本和组织的差别选择合适的内参抗体,以确保实验的准确性。
常言道,实践是检验真理的唯一标准,因而对于文献或专利中现成的已经验证过的亲和力高、特异性强的抗体,作为伸手党的我们只需将拿来主义进行到底即可。此时仍需要特别注意的是:文章的可靠性,要参考影响因子高于5分的文章;实验必须是同一类实验,别人做IHC的抗体用做WB是没有意义的。
即便如此,在相应抗体购买回来后,我们仍需做些简单预实验来保证抗体的特异性。如果结果中阳性阴性条带齐出现,那么就可以好好找卖你抗体的那个人,亮出你的结果,问问他说好的只靶定一种蛋白,现在条带满天飞是个什么状况。如果只有阳性有条带,阴性没有条带,那么恭喜你,你确实买到了一管靠谱的好抗体,可以放心大胆的开始正式实验了。如果阳性没有条带,那么你买的肯定是假抗体无疑,退货无误!
最后,给大家安利几个抗体搜索网站。这些网站都有模糊搜索功能,因而小伙伴们在搜索抗体时,一定要注意抗体名称,不要把其它无关的抗体当成了自己需要的;另外,由于很多抗体名称不是唯一的,所以有时搜索出来的抗体名称可能不一定是你输入的名称,但确实是你需要的抗体,因为大部分基因都是有别名的,需要看仔细了。
1.CiteAb
网址:https://www.citeab.com/
CiteAb(www.citeab.com)是英国Bath大学的Andrew博士创立的。他们搜集了众多抗体公司的3百多万个抗体,汇总了百万多Citation数据,对我们选择抗体有一定的指导意义。
2.Biocompare
网址:http://www.biocompare.com/
打开网页后在Search Product下的文本框内输入你需要的抗体的抗原名称,in后面的下拉菜单中选择\"Antibodies\",再search就行了。
3.Antibodyresource
网址:http://www.antibodyresource.com
打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后即可返回搜索结果,也可以用application以及其它选项对结果进行过滤。
4.Labome
网址:http://www.labome.com
打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后返回系统生成的一系列关键词,选有antibody的那一个关键词即可返回抗体搜索结果.
5.Antibodypeida
网址:http://www.antibodypedia.com
打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后下方即返回搜索结果,界面清晰明了,但是收录的抗体公司相对较少。
参考文章:1.The secret war against counterfeit science
2.A genecentric Human Protein Atlas for expression profiles based on antibodies
3.How to Choose Quality Antibodies for Successful Western Blotting
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